關于(yú)鹽酸二甲雙胍中遺傳毒性物質NDMA檢測方案（氣質、液質）

1. 概述

遺傳毒性是(shì)指遺傳物質中任何有害變化引起的(de)毒性，而(ér)不(bù)參考誘發該變化的(de)機制，又稱爲(wéi / wèi)基因毒性。遺傳毒性雜質是(shì)指能引起遺傳毒性的(de)雜質，包括緻突變型雜質和(hé / huò)其他(tā)類型的(de)無緻突變性雜質。緻突變型雜質指在(zài)較低水平時(shí)也(yě)有可能直接引起DNA損傷，導緻NDA突變，從而(ér)可能引發癌症的(de)遺傳毒性雜質。目前遺傳毒性列表中有1574種緻癌物質，亞硝胺類、磺酸酯類和(hé / huò)苯并芘類等屬于(yú)高遺傳毒性物質。由于(yú)遺傳毒性雜質在(zài)低暴露水平時(shí)就(jiù)可能導緻嚴重的(de)毒性，存在(zài)重大(dà)的(de)安全風險，所以(yǐ)評估和(hé / huò)控制藥品中的(de)遺傳毒性雜質是(shì)保障藥品質量和(hé / huò)安全的(de)重點。

2. NDMA的(de)基本信息

N- 二甲基亞硝胺又稱二甲基亞硝基胺，縮寫爲(wéi / wèi) NDMA，黃色液體，可溶于(yú)水、乙醇、乙醚、二氯甲烷，屬于(yú)亞硝胺類化合物。NDMA的(de)合成通常由二甲胺與亞硝酸鹽在(zài)酸性條件下反應生成。NDMA在(zài)環境、工業産品、煙草及腌制食品等中廣泛存在(zài)，常用作溶劑、有機合成中間體等。分子(zǐ)式爲(wéi / wèi)C2H6N2O，分子(zǐ)量74.08。根據歐盟發布的(de)《Development of structure alerts for the in vivo micronucleus assay in rodents》中的(de)相關信息，可知 NDMA 的(de)結構式中含有烷基亞硝酸鹽的(de)遺傳毒性警示結構。此外，有文獻報道(dào)，在(zài)已檢測的(de) 300 種亞硝胺類化合物中，已證實有 90% 至少可誘導一(yī / yì ／yí)種動物緻癌，其中乙基亞硝胺、二乙基亞硝胺和(hé / huò)二甲基亞硝胺至少對 20 種動物具有緻癌活性。根據 ICH M7 通則對基因毒性雜質的(de)分類原則，NDMA 應屬于(yú)第一(yī / yì ／yí)類已知誘變性和(hé / huò)緻癌性的(de)物質。在(zài)世界衛生組織國(guó)際癌症研究機構公布的(de)緻癌物清單中 NDMA 被列爲(wéi / wèi) 2A 類緻癌物。

3. NDMA雜質的(de)來(lái)源及控制限度

是(shì)遺傳毒性雜質主要(yào / yāo)來(lái)源于(yú)原料藥合成過程中的(de)起始物料、中間體、試劑和(hé / huò)反應副産物。此外，藥物在(zài)合成、儲存或者制劑生産過程中也(yě)可能會降解産生遺傳毒性雜質。藥物中 NDMA 的(de)可能來(lái)源包含以(yǐ)下方面：

1. 硝酸環境下與體系中的(de)二甲胺發生反應得到(dào)

2. 藥物本身發生降解産生二甲胺，然後繼續與硝酸鹽反應得到(dào)

3. 生産工藝過程中使用了(le／liǎo)二甲胺前體試劑，由其發生降解得到(dào)

4. 藥物含有二甲胺或者類似結構，通過氯胺化或者氧化等途徑降解産生 NDMA，如雷尼替丁、二甲雙胍等

5.  藥物合成過程中使用了(le／liǎo)疊氮試劑或亞硝酸鹽，在(zài)有二甲胺供體的(de)情況下反應生成 NDMA，如四氮唑類

藥物缬沙坦、厄貝沙坦、氯沙坦等

6. 其他(tā)途徑引入，如制藥用水、輔料等

參考 ICH M7 通則對遺傳毒性雜質的(de)分類原則，NDMA 應屬于(yú)第一(yī / yì ／yí)類已知具有基因毒性和(hé / huò)緻癌性的(de)物質，其控制不(bù)高于(yú)化合物可接受限度（AI）。根據 WHO 的(de)數據，NDMA 的(de) AI 值爲(wéi / wèi) 0.005~0.016 μg/kg，換算後爲(wéi / wèi) 0.375~1.2 μg/ 天。但對于(yú)缬沙坦等患者需要(yào / yāo)長期服用的(de)藥物來(lái)說(shuō)，對其中的(de)遺傳毒性雜質的(de)控制要(yào / yāo)求則更爲(wéi / wèi)嚴格。“缬沙坦事件”後，中國(guó)藥品監督管理局在(zài)官網上(shàng)公示了(le／liǎo)國(guó)家藥典委《關于(yú)缬沙坦國(guó)家标準修訂稿》，增訂了(le／liǎo)缬沙坦生産要(yào / yāo)求，規定了(le／liǎo) NDMA 的(de)限度不(bù)得過千萬分之(zhī)三（相當于(yú) EMA 的(de)暫定參考限定值 0.3ppm）。“缬沙坦事件”持續發酵後，2018 年 12 月，FDA 發布了(le／liǎo)血管緊張素 II 受體拮抗劑（ARB）中亞硝胺雜質的(de)臨時(shí)可接受攝入水平供生産商用以(yǐ)确保其制劑産品對患者是(shì)安全的(de)。從 FDA 發布的(de) ARB 藥物中NDMA 和(hé / huò) NDEA 臨時(shí)限度列表可知，NDMA 的(de)可接受攝入量爲(wéi / wèi) 96 ng/ 天。根據各 ARB 的(de)最大(dà)日劑量，則可計算 NDMA 的(de)可接受攝入含量。如缬沙坦以(yǐ)最大(dà)日劑量 320 mg 計，NDMA 的(de)可接受含量爲(wéi / wèi) 0.3 ppm，與中國(guó)及 EMA 要(yào / yāo)求的(de)限度相同。對于(yú)雷尼替丁，FDA 在(zài)公告信中提到(dào)，建議公司如檢測發現 NDMA 超出(chū)可接受日攝入水平（雷尼替丁 96 ng/ 天或 0.32 ppm）則應召回其産品。同樣地(dì / de)，在(zài) FDA 的(de)公告信中也(yě)提到(dào)二甲雙胍中NDMA 的(de)可接受日攝入水平爲(wéi / wèi) 96 ng/ 天，根據該值及最大(dà)日劑量則可計算出(chū)二甲雙胍藥品中 NDMA 的(de)限度控制水平。如鹽酸二甲雙胍片最大(dà)日劑量爲(wéi / wèi) 2 g，則該産品中 NDMA 的(de)可接受攝入水平是(shì) 0.048 ppm。

4. NDMA雜質的(de)檢測方法

藥品中遺傳毒性雜質 NDMA 的(de)含量極微，控制限度比較低，對檢測方法靈敏度提出(chū)了(le／liǎo)很高的(de)要(yào / yāo)求。目前中國(guó)藥典委員會、美國(guó) FDA、歐洲藥典委員會 EDQM 及加拿大(dà)衛生部等機構公布的(de) NDMA 檢測方法主要(yào / yāo)有 GCMS、GC-MS/MS、LC、LC-HRMS、LC-MS/MS 法等

我司針對鹽酸二甲雙胍原料及制劑中NDMA含量檢驗進行方法開發，包括氣質、液質2種方法。鹽酸二甲雙胍片、腸溶片、緩釋片及原料資料參考結果如下：